畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (1): 69-76.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.01.009
陈亚冰1,符梅1,兰道亮2,林宝山1,黄偲1,李键2*
CHEN Ya-bing1,FU Mei1,LAN Dao-liang2,LIN Bao-shan1,HUANG Cai1,LI Jian2*
摘要:
本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞系,并对建立的细胞系生物学特性进行鉴定,采用组织块种植法,分离培养乳腺上皮细胞;通过胰酶消化法纯化细胞;利用免疫荧光及Western blot技术对其进行鉴定;脂质体介导法将绿色荧光蛋白基因转染进乳腺上皮细胞中,荧光显微镜下检测绿色荧光蛋白基因表达;金黄色葡萄球菌侵染牦牛乳腺上皮细胞,流式细胞仪(AnnexinV/PI 双染法)检测乳腺上皮细胞的凋亡,RT-PCR检测感染细胞中抗菌肽以及凋亡因子表达。结果表明,分离纯化获得牦牛乳腺上皮细胞,细胞角蛋白18表达呈阳性,波形蛋白表达呈阴性,证明培养的细胞是上皮细胞并且没有成纤维细胞污染;β-酪蛋白表达呈阳性,说明建立的乳腺上皮细胞具有一定的泌乳功能;荧光显微镜能够检测到绿色荧光蛋白表达,表明EGFP基因成功导入了乳腺上皮细胞;金黄色葡萄球菌感染牦牛乳腺上皮细胞3 h后, Annexin V/PI 双染法检测发现感染组细胞凋亡率明显升高,差异显著(P<0.05);感染细胞中TAP(P<0.01)、BNBD5(P<0.01)及BAX(P<0.01)表达量明显增高,BCL-2(P<0.05)表达量降低。综上表明,本研究成功建立了一株稳定的牦牛乳腺上皮细胞系,该细胞系能够作为研究牦牛乳腺发育及分化的体外研究模型。
中图分类号: